De fire vigtigste metoder til mikrobiel analyse omfatter vækstmåling, mikrobiel tælling, fysiologisk indeks og udstrygningsmikroskopi.
Vækstmåling
Volumenmåling: Mikroorganismers vækststatus afspejles ved at måle mængden af hyfer i et bestemt volumen dyrkningsmedium. Denne metode er enkel og hurtig, men fejlen er stor.
Tørvægtsmetode: Tørvægten af mikroorganismer bestemmes ved centrifugering eller filtrering. Denne metode er mere besværlig og bruges normalt, når det mikrobielle produkt er en bakteriecelle, såsom tørgær, foder mv.
Turbidimetri: Absorbansværdien ved en bestemt bølgelængde måles med et ultraviolet spektrofotometer for at bestemme vækststatus for mikroorganismer. Denne metode bruges hovedsageligt til overvågning af bakterievækst i fermenteringsindustrien.
Myceliumlængdemåling: For filamentøse svampe og nogle actinomyceter kan længden af hyfervækst inden for et bestemt tidsrum måles på dyrkningsmediet.
Mikrobiel tællemetode
Hemocytometermetode: enkel, intuitiv og hurtig, men kun egnet til at tælle sporer produceret af enkeltcellede mikroorganismer eller filamentøse mikroorganismer, og resultaterne inkluderer døde og levende bakterier23.
Farvningstællemetode: Brug farvestoffer som neutral rød, trypanblå og methylblå til at skelne døde celler fra levende celler.
Væskefortyndingsmetode: Udfør en ti-dobbelt seriefortynding af den ukendte bakterieprøve, noter antallet af reagensglas med vækst ved hver fortynding efter dyrkning, og beregn derefter indholdet af levende bakterie baseret på prøvens fortyndingsmultiple. Denne metode er mere besværlig, men antallet af levende bakterier kan beregnes.
Tællemetode for pladekolonier: Spred den fortyndede bakterieopløsning på et fast dyrkningsmedium, og beregn antallet af bakterier i den originale bakterieopløsning efter dyrkning. Denne metode kan indhente information om levende bakterier, men operationen er besværlig og kræver en vis mængde dyrkningstid.
Fysiologisk indikatormetode
Beregning af kvælstofindhold: Kvælstofindholdet i de fleste bakterier er 12,5 % af tørvægt. Mikroorganismers vækststatus kan indirekte afspejles ved at måle nitrogenindholdet.
Beregning af kulstofindhold: Brug K2Cr2O7-opløsning til at måle absorbans ved en specifik bølgelængde, tegn en standardkurve for at beregne vækstmængden.
Reducerende sukkerbestemmelsesmetode: Afspejle vækststatus for mikroorganismer ved at måle mængden af reducerende sukker, som ofte bruges i storstilet industriel fermenteringsproduktion.
Bestemmelse af andre fysiologiske stoffer: Herunder nukleinsyre, ATP og andet indhold, samt syreproduktion, gasproduktion, iltforbrug, varmeproduktion og andre indikatorer.
Smøremikroskopi
Udstrygningsmikroskopi er en metode til undersøgelse af bakterier, cytologi, enzymbakterier, mikrofilariae og kolesterolkrystaller. Ved at forberede udstrygninger og observere dem under et mikroskop, kan mikroorganismers morfologi og struktur forstås intuitivt
